Isolation of a chromosomally engineered durum wheat line carrying the common wheat Glu-D1d allele

Abstract - A 1DL chromosomal segment, containing the Glu-D1d allele coding for the '5+10' HMW glutenin subunits, has been transferred into the 1AL arm of a tetraploid derivative by means of ph1c induced homoeologous recombination in backcross progeny derived from an initial common wheat x durum wheat cross. The involvement of 1 AL in the exchange, which could not be directly proved by the protein assay because of the null condition at the Glu-Al locus in all durum wheat parents used, was unequivocally demonstrated using the D genome specific, highly repeated DNA sequence pAs1 as probe in fluorescence in situ hybridization (FISH) experiments. The Glu-D1d tetraploid carrier in fact exhibits a normal 1AS and a recombined 1AL, with a distal segment of clear 1DL origin. The difference between the FISH patterns of recombined and normal 1AL was used to discriminate homozygous from heterozygous Glu-D1d carriers already in F2 populations, in which the recombined chromosome appeared to be transmitted normally through both germlines. Preliminary tests also show no reduction in fertility due to either one or two doses of the engineered chromosome, whose impact on various pasta and bread making quality parameters will be assessed. (© Inra/Elsevier)

Résumé - Isolement par manipulation chromosomique d'une lignée de blé dur contenant l'allèle Glu-D1d du blé tendre. Au moyen de la recombinaison homéologue induite par la mutation ph1c dans la descendance issue du rétrocroisement d'un blé tendre par un blé dur, un segment du chromosome 1DL a été transféré dans le bras 1AL d'un dérivé tétraploïde. Le segment contient l'allèle Glu-D1 codant pour les sous-unités des gluténines de poids moléculaire élevé (HMW) « 5 + 10 ». L'implication dans l'échange du chromosome 1AL, qu'il n'a pas été possible de démontrer par l'essai protéique à cause de la condition nulle de l'allèle au locus Glu-A1 de tous les blés durs employés, a été démontrée par l'hybridation in situ en fluorescence (FISH) avec la séquence répétée pAs1 spécifique du génome D. En effet, la lignée tétraploïde contenant l'allèle Glu-D1d montre un 1AS normal et un 1AL recombiné, avec un segment distal qui provient clairement du chromosome 1DL. Les différents profils d'hybridation des chromosomes 1AL normal et recombiné ont été utilisés pour distinguer les homozygotes Glu-D1d des hétérozygotes dans les populations F2, dans lesquelles nous avons observé une transmission normale du chromosome recombiné par les voies mâle et femelle. Des essais préliminaires n'ont indiqué aucune réduction de la fertilité tant des homozygotes que des hétérozygotes pour le chromosome recombiné. (© Inra/Elsevier)