Agronomie 14 (1994) 33-39
DOI: 10.1051/agro:19940104

A comparative analysis between [³²P] and digoxigenin-labelled single-copy probes for RFLP detection in wheat

YH Lu^a, M. Merlino^a, PG Isaac^b, J. Staccy^b, M. Bernard^a and P. Leroy<sup>a

a</sup>  INRA, Station d'Amélioration des Plantes, F63039 Clermont-Ferrand Cedex 2, France
^b  Nickerson, Cambridge Science Park, Milton Road, Cambridge, CB4 4GE, UK

Abstract - The RFLP technique is widely used in plant-genome mapping and other genetic analyses. While it has great potential as a tool for plant breeders, the requirement for radioisotopes has limited its routine use. Here, we have used a commercially available nonisotopic method, the digoxigenin-labelling and detection system (Boehringer Mannheim), with modifications, to analyse a complex polyploid genome such as wheat, and have obtained results equivalent to the isotopic method. The detailed experimental procedures are described. This nonisotopic method will facilitate various RFLP-based genome analyses.

Résumé - Analyse comparative entre les sondes mono-copie marquées au [³²P] et à la digoxigénine pour la détection de PLFR chez le blé. Le polymorphisme de longueur des fragments de restriction (PLFR) a été largement utilisé pour l'établissement de cartes génétiques des plantes et pour diverses études génétiques. Bien qu'elle présente d'intéressantes potentialités et perspectives pour les sélectionneurs, l'utilisation des éléments radioactifs dans cette technique a limité son application en routine. Nous avons modifié et amélioré une des méthodes non radioactives commercialement disponibles, le marquage à la digoxigénine (Boehringer Mannheim), pour l'analyse d'un génome polyploïde tel que le blé. Les résultats obtenus sont comparables à ceux de la méthode radioactive. Les procédures expérimentales sont décrites en détail. Cette méthode non radioactive devrait faciliter tous les types d'analyses des génomes par la méthode PLFR.

Key words: RFLP / digoxigenin / nonradioactive method / chemiluminescence / Triticum aestivum = wheat

Mots clés : PLFR / digoxigénine / Triticum aestivum = blé