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Issue
Agronomie
Volume 16, Number 3, 1996
Page(s) 143 - 151
DOI http://dx.doi.org/10.1051/agro:19960302
Agronomie 16 (1996) 143-151
DOI: 10.1051/agro:19960302

Détection d'Erwinia chrysanthemi pv dianthicola par le test Elisa après enrichissement bactérien

A. Nassar, J.P. Narcy and M. Lemattre

Unité de pathologie végétale, Inra, route de Saint-Cyr, F-78026 Versailles, France

Résumé - L'indexage des boutures d'oeillet vis-à-vis d'Erwinia chrysanthemi pv dianthicola (Ech) repose sur l'établissement d'un diagnostic fiable de la bactérie, en particulier dans les organes sans symptôme, faiblement infectés. La méthode Elisa mieux adaptée au traitement d'échantillons nombreux a été choisie. Avec le sérum polyclonal dont la spécificité est évaluée dans cet article, cette méthode permet d'identifier 5 x 103 bactéries.mL-1. Différentes conditions d'incubation de l'échantillon à analyser en Das-Elisa sont étudiées de manière à multiplier Ech pour l'amener à une concentration supérieure à celle du seuil de détection établi. Les milieux LB et CVP permettent de multiplier rapidement la bactérie mais diminuent l'accrochage bactérie-anticorps au cours de la détection immunoenzymatique. L'incubation de l'échantillon dans l'eau physiologique à 30 °C permet, sans intervenir sur l'accrochage bactérie-anticorps, d'amplifier l'inoculum primaire. Le protocole d'analyse associant l'enrichissement et la technique Das-Elisa et son exploitation à grande échelle sont discutés sur le plan technique.


Abstract - Detection of Erwinia chrysanthemi pv dianthicola (Ech) by the DAS-ELISA method in symptomless carnation cuttings. This method, using a polyclonal antiserum, the specificity of which was evaluated in this study, can detect up to 5 x 103 cfu.mL-1. Different incubation conditions of carnation stem samples to be tested by DAS-ELISA were studied, in order to amplify the primary inoculum in weakly-infected symptomless samples. The aim was to increase the detection limits. The media LB and CVP, which ensure enrichment of Ech in samples, interfere with efficient antigen-antibody interaction. By contrast, incubation of samples in saline at 30 °C allows amplification without loss of antibody recognition. The exploitation of this method for routine analysis of carnation stem samples is discussed.


Key words: E chrysanthemi pv dianthicola / carnation / enrichment / DAS-ELISA

Mots clés : Erwinia chrysanthemi pv dianthicola / oeillet / enrichissement / Das-Elisa