Free access
Issue
Agronomie
Volume 10, Number 9, 1990
Page(s) 767 - 772
DOI http://dx.doi.org/10.1051/agro:19900908
Agronomie 10 (1990) 767-772
DOI: 10.1051/agro:19900908

Some factors related to protoplast culture and plant regeneration from leaf mesophyll protoplasts of Magdeburg chicory (Cichorium intybus L var Magdeburg)

C. Rambaud, J. Dubois and J. Vasseur

Université des Sciences et Techniques de Lille-Flandres Artois, Laboratoire de Physiologie de la différenciation et biotechnologies végétales, 59655 Villeneuve d'Ascq, France

Abstract - Conditions have been established for efficient plant regeneration from protoplasts of the cultivar Pevele of Cichorium intybus L var Magdeburg. In order to increase the yield of protoplasts which are able to undergo cell divisions during the first week of culture, protoplasts of Magdeburg chicory were cultured in a Murashige and Skoog (1962) modified medium containing 2 mg/l ANA, 1 mg/l BA, 10 g/l sucrose, a mixture of glutamine-KNO3 as nitrogen source and were placed at a temperature of 30°C. With this method, cell walls can be regenerated within 24 h and after a lapse of 1-2 d, cell division became apparent and continuous divisions led to callus formation and then to plantlet regeneration. Special emphasis has been paid to leaf material for protoplast culture. Donor plantlets, aged 14 d and cultivated in a photoperiod of 16:8 h under a light intensity of 15 W.m- 2 (fluorescent light tubes "Deluxe Cool White") gave a better yield of microcalli. These were then incorporated in a proliferation medium containing agarose at low gel temperature. During this phase it is better to use Petri dishes of large diameter regardless of the amount of microcalli transferred.


Résumé - Quelques facteurs liés à la culture et la régénération de protoplastes issus du mésophylle de feuilles de chicorée de Magdebourg (Clchorium intybus L var Madgebourg). Nous avons déterminé les conditions nécessaires à la régénération de plantes à partir de protoplastes du cultivar Pévèle de Cichorium intybus L var Magdebourg. De manière à augmenter le nombre des cellules capables de se diviser durant la 1re semaine, les protoplastes de chicorée de Magdebourg sont cultivés à 30 °C, sur un milieu de Murashige et Skoog (1962) modifié, contenant 2 mg/l ANA, 1 mg/l BA, 10 g/l saccharose et un mélange de glutamine-KNO3 comme source azotée. De cette manière les parois cellulaires se reforment en 24 h et après 1-2 j, les divisions conduisent à la formation de cals puis à la régénération de plantes. L'amélioration du rendement en microcals viables exige de prendre en compte les conditions de culture ainsi que l'âge des plantules sur lesquelles seront prélevées les feuilles à l'origine des protoplastes. C'est avec des plantules donatrices, âgées de 14 j, et cultivées en photopériode 16 : 8 sous une intensité lumineuse de 15 W.m-2 fournie par des tubes fluorescents de type «Deluxe Cool White», que le rendement en microcals est le meilleur. Les microcals sont ensuite incorporés dans un milieu de prolifération contenant l'agarose à basse température de gélification. Durant cette phase, il est préférable d'utiliser des boîtes de Petri de grand diamètre, quelle que soit la quantité de microcals transférés.


Key words: protoplast / regeneration / Cichorium intybus L var Magdeburg

Mots clés : protoplaste / régénération / Cichorium intybus L var Madgebourg